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為什么需要單細(xì)胞分辨率？ 生物學(xué)就像宇宙一樣。它非常復(fù)雜，有許多獨(dú)特的單體，也就是細(xì)胞。這些細(xì)胞相互作用并扮演不同的角色，在更大的體系中構(gòu)建并驅(qū)動(dòng)多個(gè)過程。就像伽利略探索宇宙的努力一樣，發(fā)現(xiàn)和定義這些細(xì)胞也需要高分辨率的工具，才能解開促成生物學(xué)復(fù)雜性的基因表達(dá)異質(zhì)性。單細(xì)胞測序能夠在以一個(gè)細(xì)胞為功能單位中開展生物學(xué)研究，闡明具體細(xì)節(jié)，構(gòu)建出一幅更大、更精細(xì)的圖譜，說明導(dǎo)致產(chǎn)生某種外在表型的不同類型的分子和細(xì)胞之間是如何相互作用的：患者為什么會(huì)復(fù)發(fā)？是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問題。烈冰生物為您提供多平臺(tái)一站式全流程單細(xì)胞測序服務(wù)。南京10X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班細(xì)胞中基因的表達(dá)是...

10× Genomics單細(xì)胞方案要求使用具有較高活性的單細(xì)胞懸液。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)因?yàn)闃颖绢愋秃椭苽鋯渭?xì)胞懸液方法的不同，容易出現(xiàn)單細(xì)胞懸液中死亡細(xì)胞的比例較高的情況。去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞和其他污染物對獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的。這是因?yàn)?，死亡的?xì)胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來。這種cell-free RNA會(huì)導(dǎo)致檢測的背景噪聲，并會(huì)影響單細(xì)胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量。因此當(dāng)樣本活性較差時(shí)，對細(xì)胞懸液中細(xì)胞活性檢測后，需要進(jìn)行一般死細(xì)胞去除的工作（一般懸液活性小于70%時(shí)考慮此操作），以保證較高的上機(jī)捕獲細(xì)胞的質(zhì)量。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測序服務(wù)。沈陽單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析關(guān)于10X ...

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細(xì)胞水平上高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù)，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性，組織解離后，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細(xì)胞捕獲，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣），并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬級別通量實(shí)驗(yàn)，可準(zhǔn)確鑒別...

單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫，從而測定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn)，并通過熒光測定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或...

Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是...

RNA測序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類強(qiáng)大的工具，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù)，幫助科學(xué)家開始揭示這種異質(zhì)性。隨后，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類型特異的基因表達(dá)，從過去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性，鑒定稀有細(xì)胞類型，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制。當(dāng)獲得了對其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識基礎(chǔ)，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn)，以獲取更深入的可行動(dòng)見解。十二年測序經(jīng)驗(yàn)，烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。南京10X Genomics...

機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激，其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”；當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí)，往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導(dǎo)致一些基因被沉默，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們在不需要純化的情況下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時(shí)序分析，即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況，構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育，但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間，而是一個(gè)虛擬的時(shí)間，是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個(gè)樣本中，也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此，不論測定了多少樣本，我們都可以采用擬時(shí)序分析對樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。烈冰單細(xì)胞測序...

基于10X Next GEM技術(shù)，單細(xì)胞測序一次實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)檢測近萬個(gè)細(xì)胞，可在一個(gè)樣本中同時(shí)獲3'端mRNA表達(dá)譜、如需和免疫組庫（TCR和BCR）的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時(shí)，即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析，監(jiān)測免疫療法的效果，研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫測序： 烈冰單細(xì)胞免疫組庫平臺(tái)具備：1000+項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)獲取1000-20000個(gè)細(xì)胞的文庫構(gòu)建，獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù)； 具備完善的免疫組庫測序和實(shí)驗(yàn)質(zhì)控流程，獲取V(D)J全長序列的配對信息；豐富的免疫組庫測序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)專屬個(gè)性化數(shù)據(jù)分析服務(wù)，搭配...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測序技術(shù)陣營在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái)。在這個(gè)空間，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識別。現(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

烈冰生物搭建近10臺(tái)10XGemomics平臺(tái)，目前為全國范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng)，每個(gè)通道上限可捕獲20000細(xì)胞，16通道一次可檢測細(xì)胞范圍為百萬級別的細(xì)胞水平。此外，單個(gè)細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型，利于稀有樣本或小細(xì)胞量類型樣本研究；細(xì)胞可適性高，對細(xì)胞大?。ㄖ睆匠^40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核）及類型無限制。細(xì)胞捕獲周期較短，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分離，無需人工操作，1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測序準(zhǔn)備工作。單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型。青島單細(xì)胞測序服務(wù)機(jī)構(gòu)...

所謂的高通量測序技術(shù)，又名大規(guī)模平行測序，是將 DNA（或者 cDNA）隨機(jī)片段化、加接頭，制備測序文庫，通過對文庫中數(shù)以萬計(jì)的克隆(colony)進(jìn)行延伸反應(yīng)，檢測對應(yīng)的信號，獲取序列信息。與傳統(tǒng)測序法（Sanger法等）相比，高通量測序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢，又快（兩天）又多（數(shù)百萬克?。?，成為目前組學(xué)研究的主要技術(shù)。單細(xì)胞測序是一個(gè)系統(tǒng)的工程，開展項(xiàng)目前您可能會(huì)先評估它提供的見解是否與您的研究問題相匹配，如果匹配，實(shí)驗(yàn)過程如何規(guī)劃，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)如何選擇，樣本如何制備，數(shù)據(jù)如何分析等等，而在這一切開始之前，我們的服務(wù)就已經(jīng)開始了，從銷售到實(shí)驗(yàn)到專業(yè)技術(shù)支持，我們開通全線對接渠道，...

一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲，小心得不償失，原因在這：單細(xì)胞測序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進(jìn)行，而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后，獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的。進(jìn)行細(xì)胞聚類時(shí)需要考慮到每個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個(gè)細(xì)胞的情況下，前后獲得的聚類圖也會(huì)出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過多時(shí)，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù)，都會(huì)對正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響，造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章，特別是很多高分文章，為什么單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個(gè)時(shí)...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測序技術(shù)陣營在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái)。在這個(gè)空間，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識別。現(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

10× Genomics官方建議，當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時(shí)應(yīng)做去除死細(xì)胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作?；诹冶嗄陠渭?xì)胞測序?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn)，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測后，考慮對細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細(xì)胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài)，失真嚴(yán)重，建議重新收集樣本進(jìn)行新...

科技的發(fā)展讓單細(xì)胞測序已經(jīng)應(yīng)用于疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵過程和事件，如前病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移性的發(fā)展，以及對多種用藥的反應(yīng)。單細(xì)胞測序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核，進(jìn)而對于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么？烈冰生物首批引進(jìn) Chromium X 平臺(tái)，開啟百萬級通量單細(xì)胞測序新時(shí)代。烈冰單細(xì)胞測...

單細(xì)胞測序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量，龐大的數(shù)據(jù)對于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求，首先針對下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié)：單細(xì)胞測序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列，不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測序結(jié)果，存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質(zhì)量評估就會(huì)變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過測序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征，即堿基測序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1% / 0.1%以下的比例。理想的測序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性，為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。烈冰生物為您提供多平臺(tái)一站式全流程單細(xì)胞測序服務(wù)。蘇州10X單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析針對單細(xì)胞測序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對細(xì)胞數(shù)量、基因...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測序技術(shù)陣營在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái)。在這個(gè)空間，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識別。現(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上，并通過微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細(xì)胞水平上高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù)，突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性，組織解離后，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細(xì)胞捕獲，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣），并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬級別通量實(shí)驗(yàn)，可準(zhǔn)確鑒別...

細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力評估在評估樣本質(zhì)量時(shí)，需要在細(xì)胞清洗和過濾之后測定細(xì)胞活力，這一點(diǎn)至關(guān)重要。測定細(xì)胞活力有許多種方法，烈冰多年單細(xì)胞測序經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)臺(tái)盼藍(lán)法在鑒定活細(xì)胞與死細(xì)胞的比例時(shí)效果很好。細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性以及目標(biāo)回收量和實(shí)際回收量之間的一致性，取決于我們了解樣本中有多少個(gè)細(xì)胞。一旦過濾和清洗完成，可采用細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備（如血球計(jì)數(shù)器或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀）進(jìn)行定量。這些設(shè)備不但能提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，還能計(jì)算出向微流體芯片上樣適量細(xì)胞所需的細(xì)胞懸液體積。測序的革新讓科學(xué)研究從個(gè)體基因差異逐漸轉(zhuǎn)為個(gè)體細(xì)胞的基因差異。陜西10X單細(xì)胞測序多組學(xué)測序烈冰與國內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作，服務(wù)于60...

相對于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問題，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細(xì)胞量，這個(gè)量級的測序細(xì)胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無論是從細(xì)胞數(shù)量上來說還是表達(dá)檢測可靠性來說，都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果，顯示...

RNA測序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類強(qiáng)大的工具，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù)，幫助科學(xué)家開始揭示這種異質(zhì)性。隨后，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類型特異的基因表達(dá)，從過去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性，鑒定稀有細(xì)胞類型，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制。當(dāng)獲得了對其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識基礎(chǔ)，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn)，以獲取更深入的可行動(dòng)見解。助力探索生命時(shí)空多維度的動(dòng)態(tài)變化的生物學(xué)信息；助力醫(yī)療健康時(shí)代！南京二代測序單...

Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞，進(jìn)行各類的Single-Cell測序建庫。當(dāng)然，通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測序，仍然在采用這樣的技術(shù)，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測序技術(shù)之前，C1仍然會(huì)是...

關(guān)于10X Genomics單細(xì)胞平臺(tái)的樣本類型和樣本制備 ：10X平臺(tái)在上機(jī)前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊，獲得分離良好的細(xì)胞懸液、無細(xì)胞隨便、極少的細(xì)胞團(tuán)塊，且細(xì)胞活力高（＞70%）；此外，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān)。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的10X Genomics平臺(tái)兼容。一般來說，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來源和細(xì)胞類型而變化。每種組織類型都是獨(dú)特的，因此，必須在開始任何單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之前優(yōu)化樣本制備，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗(yàn)，累積10+物種、50+組織的消化protocol，若您的樣本為組織...

相對于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問題，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細(xì)胞量，這個(gè)量級的測序細(xì)胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此，這兩種技術(shù)對于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無論是從細(xì)胞數(shù)量上來說還是表達(dá)檢測可靠性來說，都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果，顯示...

單細(xì)胞多組學(xué)帶來的突破 單細(xì)胞測序方法不但改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)過程，還幫助科學(xué)家在健康和疾病研究的關(guān)鍵領(lǐng)域取得新進(jìn)展。那些過去從轉(zhuǎn)錄平均值或單項(xiàng)參數(shù)讀取中無法獲得的新發(fā)現(xiàn)正在改變我們對傳染病、神經(jīng)退行性疾病等疾病的認(rèn)識。從鑒定新的細(xì)胞類型和狀態(tài)，到揭開疾病用藥應(yīng)答和耐藥的潛在機(jī)制，單細(xì)胞測序正在推動(dòng)突破性的研究，有望改變生物學(xué)和醫(yī)療。無論是無法解釋的疾病，還是人體或自然界中尚未探索的系統(tǒng)，曾經(jīng)模糊的東西正變得越來越清晰。隨著我們邁向科學(xué)的未來，我們手頭的工具就像伽利略的望遠(yuǎn)鏡一樣能夠提高焦距和放大倍數(shù)，而定義科學(xué)未來的知識新深度是十年前的人們所無法想象的。烈冰斥巨資引進(jìn)Novaseq6000，開啟更大...

單細(xì)胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn)，100+組織類型解離protocol，精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系，確保單細(xì)胞的獲得。 凍存樣本無法實(shí)驗(yàn)，珍貴樣本無法使用？ 烈冰采用國際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過濾技術(shù)，確保凍存組織使用。 珍貴樣本，細(xì)胞數(shù)量太少，消化背景雜無法做單細(xì)胞？ 采用國際認(rèn)可的10X Genomics，BD Rhapsody雙平臺(tái)模式，根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少，背景雜也能做單細(xì)胞。 單細(xì)胞RNA分類精度不足，部分細(xì)胞無法細(xì)分？ 烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，真正做...

單細(xì)胞獲得困難，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn)，100+組織類型解離protocol，精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系，確保單細(xì)胞的獲得。 凍存樣本無法實(shí)驗(yàn)，珍貴樣本無法使用？ 烈冰采用國際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過濾技術(shù)，確保凍存組織使用。 珍貴樣本，細(xì)胞數(shù)量太少，消化背景雜無法做單細(xì)胞？ 采用國際認(rèn)可的10X Genomics，BD Rhapsody雙平臺(tái)模式，根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少，背景雜也能做單細(xì)胞。 單細(xì)胞RNA分類精度不足，部分細(xì)胞無法細(xì)分？ 烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，真正做...

單細(xì)胞多組學(xué)提升見解 基于測序的數(shù)據(jù)能夠?qū)⒄蔑@其強(qiáng)大之處，因?yàn)樗軌蛄私馔粏渭?xì)胞的多種生物分析指標(biāo)。如果說單細(xì)胞基因表達(dá)提供了一種顏色的詳細(xì)信息，那么單細(xì)胞多組學(xué)提供了同一細(xì)節(jié)的全彩色圖譜，為您帶來樣本的真實(shí)視圖。烈冰2021年強(qiáng)勢引進(jìn)的10x Genomics Chromium單細(xì)胞平臺(tái)能夠從同一單細(xì)胞中讀取細(xì)胞復(fù)雜性的多組學(xué)特征。與傳統(tǒng)方法不同，單細(xì)胞多組學(xué)簡化了您需要開展的實(shí)驗(yàn)，也節(jié)省了您需要分析的樣本，而能獲得相同的結(jié)果。這不但節(jié)省了寶貴的樣本，還保證了更高的生物學(xué)準(zhǔn)確性，因?yàn)槟恍枰ヅ洳鸱謽颖镜臄?shù)據(jù)集并通過計(jì)算來推斷各個(gè)組學(xué)之間的關(guān)系。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次顛覆性的改變...

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟。在理想狀況下，一旦制備好樣本，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì)，因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間，以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用。例如，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時(shí)間，它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離，增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn)，而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù)，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。此外，有些細(xì)胞更加粘稠，形成團(tuán)塊的速度更快。對于這些細(xì)胞，必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。附加流式分選細(xì)胞表面M...

單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過程，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過，每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫，從而測定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn)，并通過熒光測定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或...