單細(xì)胞多組學(xué)提升見解 基于測(cè)序的數(shù)據(jù)能夠?qū)⒄蔑@其強(qiáng)大之處,因?yàn)樗軌蛄私馔粏渭?xì)胞的多種生物分析指標(biāo)。如果說單細(xì)胞基因表達(dá)提供了一種顏色的詳細(xì)信息,那么單細(xì)胞多組學(xué)提供了同一細(xì)節(jié)的全彩色圖譜,為您帶來樣本的真實(shí)視圖。烈冰2021年強(qiáng)勢(shì)引進(jìn)的10x Genomics Chromium單細(xì)胞平臺(tái)能夠從同一單細(xì)胞中讀取細(xì)胞復(fù)雜性的多組學(xué)特征。與傳統(tǒng)方法不同,單細(xì)胞多組學(xué)簡(jiǎn)化了您需要開展的實(shí)驗(yàn),也節(jié)省了您需要分析的樣本,而能獲得相同的結(jié)果。這不但節(jié)省了寶貴的樣本,還保證了更高的生物學(xué)準(zhǔn)確性,因?yàn)槟恍枰ヅ洳鸱謽颖镜臄?shù)據(jù)集并通過計(jì)算來推斷各個(gè)組學(xué)之間的關(guān)系。烈冰單細(xì)胞測(cè)序,助力您的深入科學(xué)探究。福州...
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié):主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn):由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中,并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞,導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此,我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10× Genomics為例,細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMI Counts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn);否則,選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因...
烈冰生物成立于2010年,與時(shí)俱進(jìn),堅(jiān)持為科研學(xué)者提供國際前沿的高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)和深度的生物信息數(shù)據(jù)分析服務(wù),已逐步發(fā)展為單細(xì)胞多組學(xué)檢測(cè)服務(wù)****。專注于“單細(xì)胞測(cè)序系列技術(shù)服務(wù)”的專精領(lǐng)域,在上海、北京、廣州、西安和江西等地?fù)碛袛?shù)千平辦公場(chǎng)所,并布局多中心產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)基地和營銷、運(yùn)營中心。2016年起連續(xù)被評(píng)為上海市****,60+項(xiàng)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán),轉(zhuǎn)化率近80%。產(chǎn)品覆蓋從單細(xì)胞測(cè)序,核測(cè)序,單細(xì)胞多組學(xué),空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等多組學(xué)聯(lián)合的實(shí)驗(yàn)+數(shù)據(jù)分析全流程服務(wù)平臺(tái)。為600+國內(nèi)高校和醫(yī)院、5000+深度合作學(xué)者用戶、10000+生命科學(xué)探索的重要科研項(xiàng)目在醫(yī)藥開發(fā)、科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)及...
烈冰與國內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作,服務(wù)于600+臨床與研究機(jī)構(gòu),1000+客戶和5000+重要科研項(xiàng)目,助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國際學(xué)術(shù)期刊(不完全統(tǒng)計(jì)),在單細(xì)胞領(lǐng)域,烈冰助力用戶發(fā)表單細(xì)胞文獻(xiàn)30+篇,總IF>300+,IF>10+以上文章占比65%以上,包含Immunity、Nature Cell Biology、Nature Plants 、Advanced Science等生物領(lǐng)域國際主流學(xué)術(shù)期刊,已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制,免疫研究、腦神經(jīng)、白血病、胚胎發(fā)育、糖尿病、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等。烈冰科技成立10余年,為...
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞上樣數(shù),為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好?一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會(huì)存在一些問題。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí),如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,上樣細(xì)胞懸液體積勢(shì)必增加,在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想(細(xì)胞活性5%、結(jié)團(tuán)率均>5%)的情況下,引入的背景信號(hào)會(huì)增加,分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括:cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時(shí),會(huì)使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果!當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí),多細(xì)胞率會(huì)增加,數(shù)據(jù)分析時(shí),此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測(cè)數(shù)和UMI檢...
烈冰科技作為國內(nèi)率先同時(shí)擁有10X Genomics和BD Rhapsody雙分選平臺(tái)的測(cè)序服務(wù)商及云計(jì)算服務(wù)供應(yīng)商,經(jīng)過多年實(shí)戰(zhàn),擁有豐富的單細(xì)胞懸液制備和分選經(jīng)驗(yàn),實(shí)測(cè)BD Rhapsody對(duì)能夠高效捕獲粒細(xì)胞。針對(duì)不同的分選平臺(tái)、建庫方法,實(shí)戰(zhàn)總結(jié)搭建出不同的數(shù)據(jù)預(yù)處理工作流程;烈冰科技NovelBrain?生物大數(shù)據(jù)平臺(tái)能有效支撐生命科學(xué)研究、醫(yī)療健康等領(lǐng)域?qū)Υ髷?shù)據(jù)分析的需求。高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)平臺(tái),包括NovaSeq 6000、10X Chromium X、BD FACSMelody、PANNORAMIC數(shù)字切片掃描儀等,配合一支來自海內(nèi)外名校、多學(xué)科交叉型的高素質(zhì)綜合團(tuán)隊(duì),為您的科學(xué)研...
10X Genomics 是一種基于 drop 的微流控技術(shù),液體在配套芯片中的微管道中流動(dòng),因此細(xì)胞直徑會(huì)受到芯片中微管道直徑的限制,微流體通道的直徑約為 50 ~ 60 um,因此捕獲細(xì)胞的直徑不能超過 40um。當(dāng)細(xì)胞直徑過大時(shí),容易出現(xiàn)管道堵塞,造成GEM生成失敗,對(duì)于神經(jīng)科學(xué)研究和心血管疾病研究的老師而言,準(zhǔn)備采用單細(xì)胞技術(shù)用于課題研究的時(shí)候,往往會(huì)遇到一個(gè)尷尬的問題,就是目標(biāo)細(xì)胞,例如神經(jīng)元細(xì)胞、成熟心肌細(xì)胞由于體積過大,不適用于 10X 單細(xì)胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細(xì)胞的直徑很大,直接超過了芯片中管道的直徑,雖然心肌細(xì)胞直徑低于 50um,但是成熟心肌細(xì)胞的長度很長,有可能堵塞通道造成...
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破,基于“邊合成邊測(cè)序”(sequencing by synthesis)和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)(massive parallel analysis,MPS),使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升,例如Illumina Solexa測(cè)序儀。Illumina的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步:樣品文庫構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長限制,樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,并在3'和5'端接上3種序列:1)Index,用于區(qū)分樣品來源;2)Adapter,用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn);3)Primer binding site,用于...
Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序(Single Cell RNA Sequencing)領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù),基于富魯達(dá)(Fluidigm?)的微流控技術(shù),大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞,進(jìn)行各類的Single-Cell測(cè)序建庫。當(dāng)然,通量還是比較小。但不可否認(rèn)的是,現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測(cè)序,仍然在采用這樣的技術(shù),如Single Cell DNA-Seq,Single Cell ATAC-Seq等,都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫。所以可以說,至少在10X和BD,或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測(cè)序技術(shù)之前,C1仍然會(huì)是...
樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化,在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫制備步驟。在理想狀況下,一旦制備好樣本,應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間,以及它們?cè)谥苽浜蠖嗑帽銘?yīng)當(dāng)被盡快使用。例如,有些細(xì)胞(如PBMC)如果在冰上放置一段時(shí)間,它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離,增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn),而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù),又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。此外,有些細(xì)胞更加粘稠,形成團(tuán)塊的速度更快。對(duì)于這些細(xì)胞,必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái),烈冰提...
基于10X Next GEM技術(shù),單細(xì)胞測(cè)序一次實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)檢測(cè)近萬個(gè)細(xì)胞,可在一個(gè)樣本中同時(shí)獲3'端mRNA表達(dá)譜、如需和免疫組庫(TCR和BCR)的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時(shí),即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析,監(jiān)測(cè)免疫療法的效果,研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫測(cè)序: 烈冰單細(xì)胞免疫組庫平臺(tái)具備:1000+項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn),一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)獲取1000-20000個(gè)細(xì)胞的文庫構(gòu)建,獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù); 具備完善的免疫組庫測(cè)序和實(shí)驗(yàn)質(zhì)控流程,獲取V(D)J全長序列的配對(duì)信息;豐富的免疫組庫測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn),實(shí)現(xiàn)專屬個(gè)性化數(shù)據(jù)分析服務(wù),搭配...
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞上樣數(shù),為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好?一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會(huì)存在一些問題。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí),如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000,上樣細(xì)胞懸液體積勢(shì)必增加,在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想(細(xì)胞活性5%、結(jié)團(tuán)率均>5%)的情況下,引入的背景信號(hào)會(huì)增加,分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括:cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時(shí),會(huì)使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果!當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí),多細(xì)胞率會(huì)增加,數(shù)據(jù)分析時(shí),此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測(cè)數(shù)和UMI檢...
單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量,龐大的數(shù)據(jù)對(duì)于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求,首先針對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié):?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測(cè)序結(jié)果,存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質(zhì)量評(píng)估就會(huì)變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過測(cè)序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征,即堿基測(cè)序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1% / 0.1%以下的比例。理想的測(cè)序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性,為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。烈冰單細(xì)胞測(cè)序,助力您的深入科學(xué)探究。陜西10X Chromium X單細(xì)胞測(cè)序百萬通量平臺(tái)10× Genomics官方建議,當(dāng)單細(xì)胞...
關(guān)于單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)樣本制備,這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過酶促或機(jī)械消化、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個(gè)樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟,以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞,并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對(duì)樣本進(jìn)行染色,標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過FACS來富集感興趣的細(xì)胞類型。解離樣本時(shí)采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟,具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細(xì)胞大小,以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何,所有樣本類型都遵循同一個(gè)基本原則,那就是生...
現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái)。在這個(gè)空間,單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引,以便下游識(shí)別。現(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引,就像生成測(cè)序文庫所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技(Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理)。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞,凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,并通過微流控技術(shù),將之輸入到第二縱向孔道,即油相孔道中。這時(shí)候,就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...
基于10X Geomics 動(dòng)態(tài)微流控技術(shù),利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開放染色質(zhì),形成短片段,單細(xì)胞ATAC測(cè)序在表觀基因組學(xué)水平上,揭示單細(xì)胞染色質(zhì)的可及性問題,區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性,獲得開放染色質(zhì)的位置、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息,是單細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的重要突破:分析每個(gè)細(xì)胞數(shù)千個(gè)獨(dú)特的染色質(zhì)開放區(qū)域,識(shí)別細(xì)胞類型和細(xì)胞狀態(tài);識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤;探究驅(qū)動(dòng)細(xì)胞類型和狀態(tài)之間基因表達(dá)差異的非編碼序列;探究細(xì)胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征等。是當(dāng)前重要的多組學(xué)研究基因表達(dá)和表觀遺傳學(xué)的手段。十二年測(cè)序經(jīng)驗(yàn),烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。北京高通量測(cè)序單細(xì)胞測(cè)...
單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,可精確地描述每一個(gè)細(xì)胞的狀態(tài),在異質(zhì)性發(fā)育過程中具有特殊的應(yīng)用價(jià)值。然而,單細(xì)胞測(cè)序無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息,對(duì)于揭示發(fā)育過程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性??臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測(cè)序,可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況??臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的加入,無疑讓單細(xì)胞測(cè)序如虎添翼,更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)。濟(jì)南單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)支持Single Cell Sequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測(cè)序技術(shù)(NGS,Next Generation Sequ...
單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,可精確地描述每一個(gè)細(xì)胞的狀態(tài),在異質(zhì)性發(fā)育過程中具有特殊的應(yīng)用價(jià)值。然而,單細(xì)胞測(cè)序無法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息,對(duì)于揭示發(fā)育過程、病理微環(huán)境都存在很大的局限性。空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以點(diǎn)陣形式記錄病理切片細(xì)胞的空間信息并進(jìn)行測(cè)序,可以精確指示點(diǎn)陣內(nèi)的全部基因表達(dá)情況??臻g轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的加入,無疑讓單細(xì)胞測(cè)序如虎添翼,更精確地勾勒了組織水平的異質(zhì)性。單細(xì)胞測(cè)序是高通量測(cè)序下的又一重大技術(shù)突破。烈冰單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是在單細(xì)胞水平上高通量測(cè)序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),突破傳統(tǒng)高通量測(cè)序的局限性,組織解離后,單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-2...
單細(xì)胞獲得困難,不同組織要求不盡相同難以搞定? 烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn),100+組織類型解離protocol,精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系,確保單細(xì)胞的獲得。 凍存樣本無法實(shí)驗(yàn),珍貴樣本無法使用? 烈冰采用國際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過濾技術(shù),確保凍存組織使用。 珍貴樣本,細(xì)胞數(shù)量太少,消化背景雜無法做單細(xì)胞? 采用國際認(rèn)可的10X Genomics,BD Rhapsody雙平臺(tái)模式,根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少,背景雜也能做單細(xì)胞。 單細(xì)胞RNA分類精度不足,部分細(xì)胞無法細(xì)分? 烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),真正做...
一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲,小心得不償失,原因在這:?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進(jìn)行,而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜,通過降維(pca),無監(jiān)督聚類以及可視化(t-SNE)得到的。進(jìn)行細(xì)胞聚類時(shí)需要考慮到每個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)模式,因此即使是相同的數(shù)據(jù),在剔除幾個(gè)細(xì)胞的情況下,前后獲得的聚類圖也會(huì)出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過多時(shí),無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù),都會(huì)對(duì)正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響,造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章,特別是很多高分文章,為什么單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個(gè)時(shí)...
單細(xì)胞測(cè)序龐大的數(shù)據(jù)烈冰生信團(tuán)隊(duì)傾情研發(fā)的NovelBrain?生信大數(shù)據(jù)分析平臺(tái),可實(shí)現(xiàn)零代碼操作、簡(jiǎn)單方便:?jiǎn)渭?xì)胞瀏覽器的操作簡(jiǎn)單,不需要命令行操作。簡(jiǎn)單拖拽、設(shè)置參數(shù)即可運(yùn)行,即使生信0基礎(chǔ)用戶也可以運(yùn)用自如;可視化展示海量結(jié)果文件:可視化展示Cluster的基因數(shù),UMI數(shù)量、線粒體RNA占比信息;以及不同Cluster對(duì)應(yīng)的細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、RNA表達(dá)量、樣本細(xì)胞分布、線粒體RNA表達(dá)量等;3D立體展示,文章動(dòng)圖先人一步:?jiǎn)渭?xì)胞瀏覽器針對(duì)t-SNE圖、UMAP圖和pseudotime結(jié)果進(jìn)行三維立體展示,更加直觀立體的觀察細(xì)胞分布和聚類情況。烈冰專精單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序領(lǐng)域。北京二代...
對(duì)于單細(xì)胞測(cè)序而言,常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜,在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項(xiàng)分析,并且數(shù)據(jù)分析時(shí)以細(xì)胞聚類(cell cluster)為討論對(duì)象,而不是像常規(guī)Bulk測(cè)序一樣以組別為分析對(duì)象,因此單細(xì)胞測(cè)序項(xiàng)目對(duì)樣本入組要求沒有Bulk測(cè)序那樣嚴(yán)格,但是單細(xì)胞測(cè)序,特別是目的為圖譜研究時(shí),需要通過提高樣本復(fù)雜度(增加樣本數(shù)),盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此,單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)時(shí)首先需要保證生物學(xué)重復(fù),不同樣本來源的樣本建議單獨(dú)進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫、測(cè)序,以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù),單個(gè)樣本分別捕獲細(xì)胞時(shí),后續(xù)分析除了整體分析以外,還可以做單樣本分析,保證分析的完備準(zhǔn)確性。助力探索生...
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié):主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn):由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中,并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞,導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此,我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10× Genomics為例,細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMI Counts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn);否則,選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因...
多樣本數(shù)據(jù)合并:Fraction of Reads Kept:合并樣本時(shí),各樣本根據(jù)Mapped Barcoded Reads per Cell數(shù)量計(jì)算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大,需要進(jìn)行Downsample處理,以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平,從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學(xué)意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究,加速科研進(jìn)程!十二年測(cè)序經(jīng)驗(yàn),累計(jì)服務(wù)與5000余項(xiàng)重要科研...
機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”;當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí),往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,導(dǎo)致一些基因被沉默,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時(shí)序分析,即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況,構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間,而是一個(gè)虛擬的時(shí)間,是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個(gè)樣本中,也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此,不論測(cè)定了多少樣本,我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。烈冰生物成立于...
烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學(xué)意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究,加速科研進(jìn)程!此外,烈冰生信團(tuán)隊(duì)根據(jù)豐富的實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗(yàn)為用戶量身打造了一款單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果解讀的神兵利器——單細(xì)胞瀏覽器(Single Cell Browser),不但可以將海量復(fù)雜的結(jié)果文件可視化,還是可以實(shí)現(xiàn)三維立體化展示的軟件。專業(yè)的生信代碼交給專業(yè)的烈冰,專業(yè)的生物學(xué)意義交給專業(yè)的您,詳情請(qǐng)咨詢烈冰生物。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測(cè)序服務(wù)。上海烈冰單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)公司單細(xì)胞獲得困難,不同組織要求不盡相同難以...
為什么需要單細(xì)胞分辨率? 生物學(xué)就像宇宙一樣。它非常復(fù)雜,有許多獨(dú)特的單體,也就是細(xì)胞。這些細(xì)胞相互作用并扮演不同的角色,在更大的體系中構(gòu)建并驅(qū)動(dòng)多個(gè)過程。就像伽利略探索宇宙的努力一樣,發(fā)現(xiàn)和定義這些細(xì)胞也需要高分辨率的工具,才能解開促成生物學(xué)復(fù)雜性的基因表達(dá)異質(zhì)性。單細(xì)胞測(cè)序能夠在以一個(gè)細(xì)胞為功能單位中開展生物學(xué)研究,闡明具體細(xì)節(jié),構(gòu)建出一幅更大、更精細(xì)的圖譜,說明導(dǎo)致產(chǎn)生某種外在表型的不同類型的分子和細(xì)胞之間是如何相互作用的:患者為什么會(huì)復(fù)發(fā)?是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問題。過去的十年,我們是知識(shí)的承載者;現(xiàn)在,我們?cè)谂?gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時(shí)代;未來我們將重新定義知識(shí)形態(tài)!北京...
相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問題,10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量,這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此,這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上,無論是從細(xì)胞數(shù)量上來說還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來說,都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù),使得其對(duì)于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象,相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說,影響幾乎可以忽略不計(jì)(10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果,顯示...
基于10X Geomics 動(dòng)態(tài)微流控技術(shù),利用Tn5轉(zhuǎn)座酶酶切開放染色質(zhì),形成短片段,單細(xì)胞ATAC測(cè)序在表觀基因組學(xué)水平上,揭示單細(xì)胞染色質(zhì)的可及性問題,區(qū)分細(xì)胞異質(zhì)性,獲得開放染色質(zhì)的位置、轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)、核小體的調(diào)控區(qū)域和染色質(zhì)狀態(tài)等信息,是單細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的重要突破:分析每個(gè)細(xì)胞數(shù)千個(gè)獨(dú)特的染色質(zhì)開放區(qū)域,識(shí)別細(xì)胞類型和細(xì)胞狀態(tài);識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤;探究驅(qū)動(dòng)細(xì)胞類型和狀態(tài)之間基因表達(dá)差異的非編碼序列;探究細(xì)胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征等。是當(dāng)前重要的多組學(xué)研究基因表達(dá)和表觀遺傳學(xué)的手段。單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析,認(rèn)準(zhǔn)烈冰NovelBrain生物信息數(shù)據(jù)分析平臺(tái)。蘇...
所謂的高通量測(cè)序技術(shù),又名大規(guī)模平行測(cè)序,是將 DNA(或者 cDNA)隨機(jī)片段化、加接頭,制備測(cè)序文庫,通過對(duì)文庫中數(shù)以萬計(jì)的克隆(colony)進(jìn)行延伸反應(yīng),檢測(cè)對(duì)應(yīng)的信號(hào),獲取序列信息。與傳統(tǒng)測(cè)序法(Sanger法等)相比,高通量測(cè)序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì),又快(兩天)又多(數(shù)百萬克?。?,成為目前組學(xué)研究的主要技術(shù)。單細(xì)胞測(cè)序是一個(gè)系統(tǒng)的工程,開展項(xiàng)目前您可能會(huì)先評(píng)估它提供的見解是否與您的研究問題相匹配,如果匹配,實(shí)驗(yàn)過程如何規(guī)劃,實(shí)驗(yàn)平臺(tái)如何選擇,樣本如何制備,數(shù)據(jù)如何分析等等,而在這一切開始之前,我們的服務(wù)就已經(jīng)開始了,從銷售到實(shí)驗(yàn)到專業(yè)技術(shù)支持,我們開通全線對(duì)接渠道,...