隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(scRNA-Seq)的蓬勃發(fā)展,其在在胚胎發(fā)育,腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性,免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功,但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響,scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真,個(gè)別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的局限性,單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(snRNA-Seq)應(yīng)運(yùn)而生,snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異,還克服了單細(xì)胞測(cè)序必須使用新鮮樣本的多個(gè)局限性。單細(xì)胞多組學(xué) 測(cè)序技術(shù)會(huì)轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測(cè)序分析和功能驗(yàn)證同時(shí) 進(jìn)行的方法。武漢single c...
冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面,需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理,使細(xì)胞中的mRNA釋放,并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序,從而獲取基因表達(dá)信息??傮w來(lái)說(shuō),空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括:組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序,而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單:組織凍存與OCT包埋。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)整合了單細(xì)胞各個(gè)組學(xué)特征, 提供了揭示細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其互動(dòng)關(guān)系的機(jī)會(huì)。烈冰科技單細(xì)...
從單細(xì)胞測(cè)序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類型的功能解析,越來(lái)越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角。通過(guò)單細(xì)胞多組學(xué)——即對(duì)不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個(gè)單細(xì)胞來(lái)源中檢測(cè)多種細(xì)胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫(kù)序列(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開(kāi)放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個(gè)實(shí)驗(yàn)可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯(cuò)誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時(shí)間)。單細(xì)胞測(cè)序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測(cè)序技術(shù)的“天花板”。單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分...
烈冰生物生信分析團(tuán)隊(duì)緊追國(guó)際前沿、整合添加多項(xiàng)國(guó)際期刊認(rèn)可的空轉(zhuǎn)分析工具,構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程;精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器,可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細(xì)胞測(cè)序分析結(jié)果,詳細(xì)深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata(原始數(shù)據(jù))到Spot-Gene的具有定位信息的表達(dá)矩陣的過(guò)程后,就進(jìn)入了空轉(zhuǎn)的第二步,去進(jìn)行Spot的Cluster的過(guò)程,熟悉單細(xì)胞測(cè)序的研究者知道,Cluster在單細(xì)胞測(cè)序中往往表示為細(xì)胞的類型,也就是說(shuō)能聚在一起采用算法分為一個(gè)群體細(xì)胞是一個(gè)Celltype(當(dāng)然分情況也會(huì)有不同)。而在空轉(zhuǎn)中,也正是由于前面提到了細(xì)胞的非單一性,導(dǎo)致了這里的分群并不是單純的同一細(xì)胞類型...
相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題,BD和10X這兩個(gè)平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1-6K不等的測(cè)序細(xì)胞量,這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的SingleCell群體類型。因此,這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上,無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō),都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托RandomCellLabel技術(shù),使得其對(duì)于NovaSeq、HiSeqXTen、Hiseq4000等設(shè)備存在的Indexhooping現(xiàn)象,相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō),影響幾乎可以忽略不計(jì)(10XGenomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果,顯示無(wú)影響。首先 出...
機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”;當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí),往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,導(dǎo)致一些基因被“沉默”,一些基因被重新“喚醒”,但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的;scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài)。擬時(shí)序分析,即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況,構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間,而是一個(gè)虛擬的時(shí)間,是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡。即使在同一個(gè)樣本中,也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此,不論測(cè)定了多少樣本,我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。單細(xì)胞測(cè)序...
reads數(shù)、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過(guò)程中:以捕獲5000個(gè)細(xì)胞、100G的測(cè)序量為標(biāo)準(zhǔn),每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右;每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類型,例如成熟的B,T,粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中,由于該類型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少,導(dǎo)致基因中位數(shù)下降。而某一疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等,他們的基因表達(dá)數(shù)較高,甚至可以超過(guò)1萬(wàn),這就導(dǎo)致該類樣本基因中位數(shù)非常高。因此,我們對(duì)細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí),需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成。未來(lái),單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的策略會(huì)繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個(gè)組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展。廈門(mén)烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析單細(xì)胞測(cè)序是指針對(duì)單...
烈冰與國(guó)內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開(kāi)展深度合作,服務(wù)于600+臨床與研究機(jī)構(gòu),1000+客戶和5000+重要科研項(xiàng)目,助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國(guó)際學(xué)術(shù)期刊(不完全統(tǒng)計(jì)),在單細(xì)胞領(lǐng)域,烈冰助力用戶發(fā)表單細(xì)胞文獻(xiàn)30+篇,總IF>300+,IF>10+以上文章占比65%以上,包含Immunity、NatureCellBiology、NaturePlants、AdvancedScience等生物領(lǐng)域國(guó)際主流學(xué)術(shù)期刊,已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制,免疫研究、腦神經(jīng)、白血病、胚胎發(fā)育、糖尿病、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等。單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)整合的一大挑戰(zhàn)在于...
單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量,龐大的數(shù)據(jù)對(duì)于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求,首先針對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié):?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測(cè)序結(jié)果,存在各種情況的序列污染。因此序列過(guò)濾及質(zhì)量評(píng)估就會(huì)變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過(guò)測(cè)序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來(lái)表征,即堿基測(cè)序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1%/0.1%以下的比例。理想的測(cè)序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后第一步的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性,為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定準(zhǔn)確和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。分子檢測(cè)型單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)中也有一些集 中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。重慶高通量測(cè)序單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序服務(wù)細(xì)胞...
BD的技術(shù)不再采用利用微流控孔道射出細(xì)胞和射出的磁珠碰撞的過(guò)程,進(jìn)行單細(xì)胞捕獲的技術(shù),轉(zhuǎn)而采用CytoSeq特有的蜂窩板技術(shù)。該技術(shù)用20萬(wàn)+的微孔(該數(shù)量級(jí)遠(yuǎn)大于Input細(xì)胞數(shù)量),保證單孔中的單細(xì)胞捕獲。同時(shí)避免了10X中存在的概率碰撞影響捕獲效率的問(wèn)題,采用微孔捕獲相對(duì)會(huì)有更好的捕獲效率(來(lái)自兩家企業(yè)商業(yè)宣傳資料比對(duì)),保證Input細(xì)胞的高效使用。對(duì)于Input細(xì)胞的量更少的情況,可以基于百萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞總量開(kāi)始進(jìn)行前期處理以及后期捕獲操作。而在細(xì)胞捕獲完成后,進(jìn)行細(xì)胞裂解后,同樣的也進(jìn)行細(xì)胞中RNApolyA序列的抓取工作。在單細(xì)胞水平上的多組學(xué)分析能夠?yàn)檠芯拷M提供前所未有的臨床和科...
單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測(cè)技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測(cè)多個(gè)不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測(cè)量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對(duì)多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時(shí),需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫(kù)以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時(shí)也要明確技術(shù)的局限性及其對(duì)研究結(jié)果的潛在影響。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次翻天覆地的改變,一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定。無(wú)錫烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)烈冰與國(guó)內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開(kāi)展深度合作,服務(wù)于...
單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)再樣本細(xì)胞上機(jī)分選簽,需要對(duì)細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞活性進(jìn)行準(zhǔn)確判斷,這對(duì)SingleCell分選標(biāo)記、建庫(kù)、下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)量都具有著決定性的作用。如若細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高,將會(huì)影響建庫(kù)的成功率;計(jì)數(shù)偏低,則會(huì)顯著提高雙細(xì)胞的比例;而細(xì)胞活率過(guò)低,就會(huì)使測(cè)序數(shù)據(jù)的利用率大打折扣,因此把好單細(xì)胞懸液質(zhì)量這一關(guān)尤為重要。而在鋪板過(guò)程中,由于不同操作人員手法具有不可避免的差異,不同的液體流速將直接影響單細(xì)胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞分選平臺(tái)配套了專門(mén)定制的電動(dòng)移液器,其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式...
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破,基于“邊合成邊測(cè)序”(sequencingbysynthesis)和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)(massiveparallelanalysis,MPS),使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升,烈冰生物斥巨資購(gòu)置的Novaseq6000測(cè)序儀的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步:樣品文庫(kù)構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制,樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,并在3和5端接上3種序列:1)Index,用于區(qū)分樣品來(lái)源;2)Adapter,用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn);3)Primerbindingsite,用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)...
BDRhapsody單細(xì)胞分選系統(tǒng)集成了熒光顯微成像系統(tǒng),可以對(duì)不同熒光標(biāo)記的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)并計(jì)數(shù)。在進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估之前,首先要將細(xì)胞的培養(yǎng)體系更換成上機(jī)所需的Buffer。在這個(gè)過(guò)程中,需要進(jìn)行多次離心、重懸操作,烈冰Novelbio單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)推薦采用水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)來(lái)進(jìn)行這步操作。這種離心機(jī)可以有效減少細(xì)胞在多次更換Buffer過(guò)程中的損失,尤其是對(duì)于細(xì)胞量較少的樣本來(lái)說(shuō),顯得非常有必要。更換完Buffer之后,還需要將細(xì)胞進(jìn)行過(guò)篩操作,去除較大的細(xì)胞團(tuán),獲得較為純凈的單細(xì)胞懸液。單細(xì)胞多組學(xué)突破了以往單細(xì)胞檢測(cè)的單一性,可更多樣化。蘇州烈冰單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)高通量測(cè)序技術(shù)(High-thro...
冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面,需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理,使細(xì)胞中的mRNA釋放,并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序,從而獲取基因表達(dá)信息??傮w來(lái)說(shuō),空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括:組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序,而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單:組織凍存與OCT包埋。在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域,將轉(zhuǎn)錄組與蛋白質(zhì)結(jié)合的代表性例子只有單細(xì) 胞RNA測(cè)序方法。西安單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持單細(xì)胞測(cè)...
2016年發(fā)表的DR-seq和G&T-seq技術(shù),實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞內(nèi)同時(shí)進(jìn)行基因組和轉(zhuǎn)錄組的測(cè)序分析,使得研究人員能夠在分析細(xì)胞間基因組差異和基因表達(dá)異質(zhì)性的同時(shí),進(jìn)一步理解基因組序列差異、拷貝數(shù)變異與轉(zhuǎn)錄組異質(zhì)性之間的關(guān)系.隨后在同一個(gè)單細(xì)胞內(nèi),基于轉(zhuǎn)錄組、染色質(zhì)可及性、染色質(zhì)構(gòu)象、DNA拷貝數(shù)、DNA甲基化、蛋白質(zhì)豐度或者空間狀態(tài)等整合分析的多組學(xué)方法也相繼出現(xiàn)。相較于利用不同的單細(xì)胞單組學(xué)測(cè)序方法從一類細(xì)胞中分別獲取轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀遺傳組等進(jìn)行分析,單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)可以從同一個(gè)單細(xì)胞中同時(shí)獲取多種組學(xué)數(shù)據(jù),可以更好地反映細(xì)胞在特定狀態(tài)下各組學(xué)間的關(guān)聯(lián)以及復(fù)雜的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。單細(xì)胞多組...
BD的技術(shù)不再采用利用微流控孔道射出細(xì)胞和射出的磁珠碰撞的過(guò)程,進(jìn)行單細(xì)胞捕獲的技術(shù),轉(zhuǎn)而采用CytoSeq特有的蜂窩板技術(shù)。該技術(shù)用20萬(wàn)+的微孔(該數(shù)量級(jí)遠(yuǎn)大于Input細(xì)胞數(shù)量),保證單孔中的單細(xì)胞捕獲。同時(shí)避免了10X中存在的概率碰撞影響捕獲效率的問(wèn)題,采用微孔捕獲相對(duì)會(huì)有更好的捕獲效率(來(lái)自兩家企業(yè)商業(yè)宣傳資料比對(duì)),保證Input細(xì)胞的高效使用。對(duì)于Input細(xì)胞的量更少的情況,可以基于百萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞總量開(kāi)始進(jìn)行前期處理以及后期捕獲操作。而在細(xì)胞捕獲完成后,進(jìn)行細(xì)胞裂解后,同樣的也進(jìn)行細(xì)胞中RNApolyA序列的抓取工作。單細(xì)胞測(cè)序是高通量測(cè)序下的又一重大技術(shù)突破。武漢單細(xì)胞多組學(xué)...
從單細(xì)胞測(cè)序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類型的功能解析,越來(lái)越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角。通過(guò)單細(xì)胞多組學(xué)——即對(duì)不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個(gè)單細(xì)胞來(lái)源中檢測(cè)多種細(xì)胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫(kù)序列(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開(kāi)放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個(gè)實(shí)驗(yàn)可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯(cuò)誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時(shí)間)。單細(xì)胞測(cè)序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測(cè)序技術(shù)的“天花板”。烈冰科技已建立了...
烈冰生物生信分析團(tuán)隊(duì)緊追國(guó)際前沿、整合添加多項(xiàng)國(guó)際期刊認(rèn)可的空轉(zhuǎn)分析工具,構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程;精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器,可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細(xì)胞測(cè)序分析結(jié)果,詳細(xì)深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata(原始數(shù)據(jù))到Spot-Gene的具有定位信息的表達(dá)矩陣的過(guò)程后,就進(jìn)入了空轉(zhuǎn)的第二步,去進(jìn)行Spot的Cluster的過(guò)程,熟悉單細(xì)胞測(cè)序的研究者知道,Cluster在單細(xì)胞測(cè)序中往往表示為細(xì)胞的類型,也就是說(shuō)能聚在一起采用算法分為一個(gè)群體細(xì)胞是一個(gè)Celltype(當(dāng)然分情況也會(huì)有不同)。而在空轉(zhuǎn)中,也正是由于前面提到了細(xì)胞的非單一性,導(dǎo)致了這里的分群并不是單純的同一細(xì)胞類型...
細(xì)胞中基因的表達(dá)是嚴(yán)格按照時(shí)間和空間順序發(fā)生,因此細(xì)胞類型和基因表達(dá)具有時(shí)間特異性和空間特異性。時(shí)間特異性可以通過(guò)收集不同時(shí)間點(diǎn)的樣本進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序來(lái)分析。但是單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(scRNA-Seq)在單細(xì)胞懸液制備的過(guò)程中破壞了細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu),無(wú)法給出固態(tài)異質(zhì)化組織中細(xì)胞空間排布信息。而空間轉(zhuǎn)錄組可以解決這個(gè)問(wèn)題,其以點(diǎn)陣形式記錄組織切片細(xì)胞的空間信息,在保留組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,獲得細(xì)胞/基因的空間表達(dá)特異性。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)提供了全新的視角來(lái)分析細(xì)胞的分化路徑、細(xì)胞間的交互調(diào)控和細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)象。濟(jì)南single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序價(jià)格烈冰科技于2010年誕生之初便立足...
單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)是在單細(xì)胞分辨率下精確分析細(xì)胞異質(zhì)性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的新技術(shù),提供了全新的視角來(lái)分析細(xì)胞的分化路徑、細(xì)胞間的交互調(diào)控和細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)象。轉(zhuǎn)錄組、表觀基因組、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)的差異賦予了組織內(nèi)同樣基因組背景下的單個(gè)細(xì)胞的功能特異性。單個(gè)細(xì)胞的組學(xué)變化決定了組織的功能狀態(tài),因此,闡明組織的細(xì)胞異質(zhì)性是破譯生理功能和病理演變的關(guān)鍵。然而,以bulkRNA測(cè)序等為**的傳統(tǒng)方法掩蓋了細(xì)胞的異質(zhì)性,細(xì)胞組學(xué)變化的平均水平。近10年來(lái),單細(xì)胞組學(xué)技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生,實(shí)現(xiàn)了在單細(xì)胞分辨率下研究分子的變化規(guī)律。烈冰生物為您提供一站式全流程單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)。深圳BD單細(xì)胞多組學(xué)數(shù)據(jù)分析高通量測(cè)序技...
SingleCellSequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測(cè)序技術(shù)(NGS,NextGenerationSequencing)分析每一個(gè)單個(gè)細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問(wèn)題來(lái)了,如何獲得單個(gè)細(xì)胞?如果無(wú)法獲得單個(gè)細(xì)胞這一切都是不成立的;如何獲得大批量的單個(gè)細(xì)胞?單個(gè)組織細(xì)胞群體通常在百萬(wàn)級(jí)別以上,如果被檢測(cè)的測(cè)序細(xì)胞數(shù)量過(guò)小精確度不足;如何低成本地獲得大批量單個(gè)細(xì)胞?單細(xì)胞測(cè)序成本非常高,尤其是需要測(cè)2000~3000個(gè)以上的細(xì)胞的時(shí)候,如果單個(gè)細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無(wú)法普及。所以,正因?yàn)檫@些問(wèn)題的存在使得高通量測(cè)序在單個(gè)...
如在現(xiàn)有研究方法基礎(chǔ)上,進(jìn)行特定亞細(xì)胞區(qū)域的蛋白質(zhì)組學(xué)、相互作用蛋白質(zhì)組學(xué)以及某種特定翻譯后修飾類型的蛋白質(zhì)組學(xué)的研究等。這將有助于諸多生化過(guò)程以及致病機(jī)理的全新認(rèn)識(shí)與發(fā)現(xiàn)。隨著基于單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜研究方法的不斷發(fā)展,單細(xì)胞分析方法的靈敏度、蛋白質(zhì)的覆蓋度、細(xì)胞通量、空間分辨率以及多組學(xué)的兼容能力會(huì)不斷突破我們的認(rèn)知極限。更重要的是,單細(xì)胞分析在臨床診斷、疾病分型以及細(xì)胞發(fā)展機(jī)制這些重大生命科學(xué)領(lǐng)域方面的應(yīng)用將會(huì)越來(lái)越大。單細(xì)胞多組學(xué) 測(cè)序技術(shù)會(huì)轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測(cè)序分析和功能驗(yàn)證同時(shí) 進(jìn)行的方法。青島BD Rhapsody單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)支持單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測(cè)技...
基因測(cè)序是基因檢測(cè)的方法之一,其又叫基因譜測(cè)序,是國(guó)際上公認(rèn)的一種基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變,一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條核酸序列進(jìn)行測(cè)定,被稱為下一代測(cè)序技術(shù)(nextgenerationsequencing),足見(jiàn)其劃時(shí)代的改變,同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能,所以又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing)?;驕y(cè)序相關(guān)產(chǎn)品和技術(shù)已由實(shí)驗(yàn)室研究逐漸演變到臨床應(yīng)用,可以說(shuō),基因測(cè)序技術(shù)將是下一個(gè)改變世界的技術(shù)。深度的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)解讀助力生物健康醫(yī)療時(shí)代。濟(jì)南BD Rhapsody單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)基于橋式PCR技術(shù)的簇生成...
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破,基于“邊合成邊測(cè)序”(sequencingbysynthesis)和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)(massiveparallelanalysis,MPS),使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升,烈冰生物斥巨資購(gòu)置的Novaseq6000測(cè)序儀的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步:樣品文庫(kù)構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制,樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,并在3和5端接上3種序列:1)Index,用于區(qū)分樣品來(lái)源;2)Adapter,用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn);3)Primerbindingsite,用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)...
單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測(cè)技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測(cè)多個(gè)不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測(cè)量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對(duì)多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時(shí),需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫(kù)以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時(shí)也要明確技術(shù)的局限性及其對(duì)研究結(jié)果的潛在影響。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測(cè)序服務(wù)。西安BD Rhapsody單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序服務(wù)公司烈冰科技作為國(guó)內(nèi)同時(shí)擁有10XGenomics和BDRhapsody雙分選平臺(tái)...
單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量,龐大的數(shù)據(jù)對(duì)于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求,首先針對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié):?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測(cè)序結(jié)果,存在各種情況的序列污染。因此序列過(guò)濾及質(zhì)量評(píng)估就會(huì)變得極為重要。序列質(zhì)量主要通過(guò)測(cè)序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來(lái)表征,即堿基測(cè)序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1%/0.1%以下的比例。理想的測(cè)序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30。保證數(shù)據(jù)獲得后第一步的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性,為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定準(zhǔn)確和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。隨著單細(xì)胞多組學(xué)的不斷進(jìn)步, 研究者將有機(jī)會(huì)在單細(xì)胞分辨率下進(jìn)一步理解個(gè)體發(fā)育以及疾病發(fā)展機(jī)制。重慶single cell 單細(xì)...
空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可以用單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析策略進(jìn)行分析,例如,利用GO和Pathway分析篩選不同發(fā)育時(shí)期特定空間區(qū)域內(nèi)的信號(hào)通路及其關(guān)鍵基因的較大情況,揭示在特定發(fā)育時(shí)期特定區(qū)域內(nèi)發(fā)生的生物學(xué)過(guò)程。針對(duì)任何一個(gè)基因,空間轉(zhuǎn)錄組可以顯示表達(dá)該基因的點(diǎn)陣及其空間排布;單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組可以給出該基因表達(dá)的細(xì)胞類群;原位測(cè)序可以給出該基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)狀況。通過(guò)不同發(fā)育時(shí)間點(diǎn)的信息比較,可以分析細(xì)胞類群在某個(gè)部位在不同時(shí)間點(diǎn)的差異,給出其在細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)的演變狀況。首先 出現(xiàn)的單細(xì)胞多組學(xué)方法就是將轉(zhuǎn)錄組與其他組學(xué)技術(shù)結(jié)合。深圳上海烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序價(jià)格機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”...
二代測(cè)序技術(shù)在測(cè)序方法上取得了重大突破,基于“邊合成邊測(cè)序”(sequencingbysynthesis)和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù)(massiveparallelanalysis,MPS),使測(cè)序通量和讀取速度得到極大提升,烈冰生物斥巨資購(gòu)置的Novaseq6000測(cè)序儀的測(cè)序原理可以簡(jiǎn)化為四步:樣品文庫(kù)構(gòu)建、簇生成、測(cè)序和數(shù)據(jù)分析。由于讀長(zhǎng)限制,樣品DNA或由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA需要被打斷成300-500bp的片段,并在3和5端接上3種序列:1)Index,用于區(qū)分樣品來(lái)源;2)Adapter,用于結(jié)合測(cè)序通道上的位點(diǎn);3)Primerbindingsite,用于結(jié)合PCR引物啟動(dòng)擴(kuò)增反應(yīng)...
SingleCellSequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測(cè)序技術(shù)(NGS,NextGenerationSequencing)分析每一個(gè)單個(gè)細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問(wèn)題來(lái)了,如何獲得單個(gè)細(xì)胞?如果無(wú)法獲得單個(gè)細(xì)胞這一切都是不成立的;如何獲得大批量的單個(gè)細(xì)胞?單個(gè)組織細(xì)胞群體通常在百萬(wàn)級(jí)別以上,如果被檢測(cè)的測(cè)序細(xì)胞數(shù)量過(guò)小精確度不足;如何低成本地獲得大批量單個(gè)細(xì)胞?單細(xì)胞測(cè)序成本非常高,尤其是需要測(cè)2000~3000個(gè)以上的細(xì)胞的時(shí)候,如果單個(gè)細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無(wú)法普及。所以,正因?yàn)檫@些問(wèn)題的存在使得高通量測(cè)序在單個(gè)...