在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Phusion Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性與實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)功能的選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Phusion DNA聚合酶的高保真特性,還通過(guò)添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段,極大地提升了實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性。Phusion Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,包含Phusion DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Phusion DNA聚合酶以其保真性而聞名,其錯(cuò)誤率比普通Taq酶低50倍以上,比Pfu酶低6倍。這種高保真性使其成為基因克隆、測(cè)序模板制備、突變分析等高精度實(shí)驗(yàn)的推薦工具。同時(shí),Phusion酶的延伸速度可達(dá)15-30秒/kb,比傳統(tǒng)Pfu酶快10倍,提高了實(shí)驗(yàn)效率。熒光染料的加入是該預(yù)混液的一大亮點(diǎn)。這種染料能夠在PCR過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況,通過(guò)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化反映目標(biāo)基因的擴(kuò)增程度。實(shí)驗(yàn)人員無(wú)需額外添加染料或進(jìn)行復(fù)雜的后處理,即可直接在PCR儀上觀察擴(kuò)增曲線,從而實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的定量分析。這種設(shè)計(jì)不僅節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,還減少了人為操作帶來(lái)的誤差。此外,Phusion Master Mix (2×) (With Dye) 的2倍濃度設(shè)計(jì)進(jìn)一步簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。CRISPR-Cas12a(以前稱為Cpf1)是一種類II型V型內(nèi)切酶,偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復(fù)序列鄰近基序。Recombinant Rat LIX/CXCL5
SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus):高效防污染的實(shí)時(shí)定量PCR解決方案SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計(jì)的2×預(yù)混液,結(jié)合了SYBR Green I熒光染料和尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)技術(shù),能夠有效防止PCR產(chǎn)物污染,提高檢測(cè)的特異性和準(zhǔn)確性。產(chǎn)品特點(diǎn)高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,有效減少非特異性擴(kuò)增,提高檢測(cè)靈敏度。防污染設(shè)計(jì):預(yù)混液中包含UDG酶和dUTP,可在PCR反應(yīng)前降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止交叉污染。通用性:含有ROX被動(dòng)參考染料,適用于所有qPCR儀器,無(wú)需根據(jù)儀器調(diào)整ROX濃度??梢暬聚櫍翰糠之a(chǎn)品含有藍(lán)色示蹤染料,加入模板后顏色變化可防止加樣錯(cuò)誤。應(yīng)用場(chǎng)景基因表達(dá)分析:用于定量檢測(cè)基因表達(dá)水平。病原體檢測(cè):快速檢測(cè)病毒、細(xì)菌等病原體的DNA。多重檢測(cè):可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因。SYBR Green qPCR Mix (2×, UDG Plus) 以其高效、特異和防污染的特點(diǎn),成為分子生物學(xué)研究和臨床檢測(cè)中的重要工具,尤其適用于需要高靈敏度和防污染的qPCR實(shí)驗(yàn)。Recombinant Cynomolgus CD83 Protein,His Tag利用His標(biāo)簽通過(guò)親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過(guò)離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。
dUTP(脫氧尿苷三磷酸)是一種特殊的核苷酸,其結(jié)構(gòu)與dTTP(脫氧胸苷三磷酸)相似,但在堿基部分含有尿嘧啶而非胸腺嘧啶。dUTP在分子生物學(xué)中具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值,尤其是在DNA合成、PCR反應(yīng)以及基于尿嘧啶的標(biāo)記和檢測(cè)中。產(chǎn)品特點(diǎn)dUTP Solution (100 mM) 是一種高純度的即用型溶液,濃度為100 mM,能夠滿足多種實(shí)驗(yàn)需求。與傳統(tǒng)的dNTP(如dATP、dTTP、dCTP和dGTP)不同,dUTP中的尿嘧啶可以被特定酶識(shí)別和作用,例如尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)。這一特性使其在某些實(shí)驗(yàn)中具有不可替代的作用。dUTP溶液經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制,確保其純度和穩(wěn)定性。其高濃度設(shè)計(jì)便于實(shí)驗(yàn)人員根據(jù)具體需求進(jìn)行稀釋和使用,同時(shí)減少了試劑添加量,降低了污染風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)用場(chǎng)景dUTP在分子生物學(xué)中具有多種獨(dú)特的應(yīng)用:PCR反應(yīng)中的熱啟動(dòng):dUTP常用于熱啟動(dòng)PCR技術(shù)中,通過(guò)引入尿嘧啶標(biāo)記的引物,利用UDG酶在PCR反應(yīng)前降解引物,從而防止非特異性擴(kuò)增。DNA標(biāo)記與檢測(cè):dUTP可用于DNA標(biāo)記,通過(guò)將尿嘧啶引入DNA鏈,后續(xù)可通過(guò)UDG酶或熒光標(biāo)記的抗尿嘧啶抗體進(jìn)行檢測(cè),實(shí)現(xiàn)對(duì)特定DNA片段的標(biāo)記和追蹤。
Taq DNA聚合酶:分子生物學(xué)的“明星酶”Taq DNA聚合酶是一種從嗜熱菌Thermus aquaticus中分離得到的耐熱性DNA聚合酶,因其獨(dú)特的耐高溫特性和高效的DNA合成能力,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的工具。該酶在PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)中發(fā)揮著重要作用,極大地推動(dòng)了基因擴(kuò)增、測(cè)序和診斷技術(shù)的發(fā)展。Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,但缺乏3'→5'外切酶活性,這使得它在DNA合成過(guò)程中能夠快速延伸引物,同時(shí)在PCR產(chǎn)物的3'端添加一個(gè)突出的A堿基,便于后續(xù)的克隆操作。此外,Taq酶的耐熱性使其能夠在PCR的高溫變性步驟中保持穩(wěn)定,從而實(shí)現(xiàn)高效的循環(huán)擴(kuò)增。近年來(lái),科學(xué)家們通過(guò)對(duì)Taq DNA聚合酶的改造和優(yōu)化,開發(fā)出多種突變體,以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。例如,Klentaq1突變體具有更高的耐熱性和保真性,適用于長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增。此外,Taq酶的5'外切酶活性還被用于開發(fā)新型的多重PCR檢測(cè)技術(shù),如“MeltArray”技術(shù),實(shí)現(xiàn)了在單次反應(yīng)中檢測(cè)多個(gè)靶點(diǎn)。Taq DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用不僅極大地簡(jiǎn)化了DNA擴(kuò)增的流程,還為基因診斷、遺傳病檢測(cè)和個(gè)性化醫(yī)療等領(lǐng)域提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。在泛素化過(guò)程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。
dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM):助力分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的高效防污染解決方案在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增和檢測(cè)的工具之一。然而,PCR產(chǎn)物的殘留污染可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)作為一種高效的防污染試劑,通過(guò)與尿嘧啶DNA糖苷酶(UDG)聯(lián)合使用,能夠有效解決這一問(wèn)題。產(chǎn)品特點(diǎn)高純度與穩(wěn)定性dNTP/dUTPMixture(2.5mMeach/5mM)采用高純度的dATP、dCTP、dGTP和dUTP,純度≥99%,確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。該產(chǎn)品在-20℃下可穩(wěn)定保存24個(gè)月,使用時(shí)需避免反復(fù)凍融。防污染機(jī)制該產(chǎn)品通過(guò)在PCR反應(yīng)中用dUTP替代dTTP,使擴(kuò)增產(chǎn)物中摻入dU堿基。隨后,UDG酶能夠特異性地降解含有dU的DNA產(chǎn)物,從而有效去除殘留的PCR產(chǎn)物污染。這種防污染系統(tǒng)特別適用于高通量PCR實(shí)驗(yàn)和需要嚴(yán)格控制假陽(yáng)性的應(yīng)用場(chǎng)景。兼容性與適用性dNTP/dUTPMixture適用于多種DNA聚合酶,如Taq酶和BstDNA聚合酶等,可用于PCR、real-timePCR、RT-PCR、引物延伸反應(yīng)以及cDNA合成等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。然而,需要注意的是,某些具有校正活性的酶可能不適用于該混合物,具體需參考酶的產(chǎn)品說(shuō)明書。實(shí)驗(yàn)人員可以根據(jù)需求選擇后續(xù)的檢測(cè)方法,例如凝膠電泳分析、平末端克隆或測(cè)序,無(wú)需擔(dān)心染料對(duì)結(jié)果干擾。Recombinant Human GDF-7/BMP-12
泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激發(fā)泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Rat LIX/CXCL5
在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Hot-Start Taq Master Mix (2×) (With Dye) 則是提升PCR特異性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液結(jié)合了熱啟動(dòng)技術(shù)和熒光染料,為效率、準(zhǔn)確的基因擴(kuò)增提供了強(qiáng)大的支持。Hot-Start Taq Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,包含Hot-Start Taq DNA聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、dNTPs、增強(qiáng)劑以及熒光染料。其優(yōu)點(diǎn)在于熱啟動(dòng)技術(shù)的應(yīng)用。通過(guò)在常溫下抑制Taq酶活性,該預(yù)混液有效避免了非特異性擴(kuò)增和引物二聚體的形成,從而提高了PCR反應(yīng)的特異性和靈敏度。這種特性尤其適用于復(fù)雜模板(如高GC含量或低豐度基因)的擴(kuò)增,以及對(duì)特異性要求較高的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。熒光染料的加入是該預(yù)混液的另一大亮點(diǎn)。這種染料在PCR過(guò)程中能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況,通過(guò)熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化反映目標(biāo)基因的擴(kuò)增程度。這種“即用型”預(yù)混液不僅節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,還減少了人為操作帶來(lái)的污染風(fēng)險(xiǎn),尤其適合高通量的基因檢測(cè)和定量分析。此外,該預(yù)混液的2倍濃度設(shè)計(jì)進(jìn)一步簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)人員只需加入模板DNA和引物,即可直接進(jìn)行反應(yīng),減少了手動(dòng)配制反應(yīng)體系的步驟和可能出現(xiàn)的誤差。Recombinant Rat LIX/CXCL5