缺口平移法是**常用的探針標(biāo)記法,反應(yīng)體系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸、一種同位素標(biāo)記的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如圖1。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機(jī)切開若干個(gè)缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓?,然后再借助于DNA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同時(shí)又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動(dòng),DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。由于反應(yīng)體系中含有同位素標(biāo)記的單核苷酸,使新合成的鏈帶有同位素標(biāo)記,所以缺口平移實(shí)際上是同位素標(biāo)記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸。把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來(lái)。普陀區(qū)優(yōu)勢(shì)探針推薦貨源
電子探針儀(圖1)主要包括:探針形成系統(tǒng) (電子槍、加速和聚焦部件等)、X射線信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)和顯示、記錄系統(tǒng)、樣品室、高壓電源和掃描系統(tǒng)以及真空系統(tǒng)。電子探針的**早應(yīng)用領(lǐng)域是金屬學(xué)。對(duì)合金中各組成相、夾雜物等可作定性和定量分析,直觀而方便,還能較準(zhǔn)確地測(cè)定元素的擴(kuò)散和偏析情況。此外,它還可用于研究金屬材料的氧化和腐蝕問(wèn)題,測(cè)定薄膜、滲層或鍍層的厚度和成分等,是機(jī)械構(gòu)件失效分析、生產(chǎn)工藝的選擇、特殊用材的剖析等的重要手段。圖2為鎂合金中稀土氧化物在晶界析出的電子探針分析照片。崇明區(qū)挑選探針按需定制電子探針可以對(duì)試樣中微小區(qū)域(微米級(jí))的化學(xué)組成進(jìn)行定性或定量分析。
電子探針(Electron Probe Microanalysis)是一種利用電子束作用樣品后產(chǎn)生的特征X射線進(jìn)行微區(qū)成分分析的儀器, [1]可以用來(lái)分析薄片中礦物微區(qū)的化學(xué)組成。除H、He、Li、Be等幾個(gè)較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進(jìn)行定性和定量分析。電子探針的大批量是利用經(jīng)過(guò)加速和聚焦的極窄的電子束為探針,激發(fā)試樣中某一微小區(qū)域,使其發(fā)出特征X射線,測(cè)定該X射線的波長(zhǎng)和強(qiáng)度,即可對(duì)該微區(qū)的元素作定性或定量分析。電子探針顯微分析原理及其發(fā)展的初期是建立在X射線光譜分析和電子顯微鏡這兩種技術(shù)基礎(chǔ)上的,該儀器實(shí)質(zhì)上就是這兩種儀器的科學(xué)組合。
探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法,所不同的是所建DNA文庫(kù)為可表達(dá)性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達(dá)抗原,然后用來(lái)源細(xì)菌的多克隆抗血清篩選陽(yáng)性克隆,所得到多個(gè)陽(yáng)性克隆再經(jīng)其它細(xì)菌的抗血清篩選,***只與本細(xì)菌抗血清反應(yīng)的表達(dá)克隆即含有此細(xì)菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達(dá)文庫(kù)篩選得到的顯然只是特定基因探針。對(duì)于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測(cè)定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。計(jì)算時(shí)應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ。
早期采用的RNA探針是細(xì)胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復(fù)制過(guò)程中得到標(biāo)記的,標(biāo)記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測(cè)。例如,在篩選逆轉(zhuǎn)錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時(shí),因無(wú)DNA探針可利用,就利用HIV的全套標(biāo)記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進(jìn)行中的轉(zhuǎn)錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時(shí),在體外將細(xì)胞核分離出來(lái),然后在α-32P-ATP的存在下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標(biāo)記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進(jìn)行雜交,便可反映出該基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài),這是一種反向探針實(shí)驗(yàn)技術(shù)。可以進(jìn)行點(diǎn)、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。崇明區(qū)特制探針售價(jià)
這種神秘的Wi-Fi探針,實(shí)際是“WiFi信道掃描工具”。普陀區(qū)優(yōu)勢(shì)探針推薦貨源
3 面分析用于測(cè)定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測(cè)量的某元素特征X射線信號(hào)的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時(shí)在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強(qiáng)度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時(shí),先測(cè)得試樣中Y元素的特征X射線強(qiáng)度IY,再在同一條件下測(cè)出已知純?cè)豗的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線強(qiáng)度IO。然后兩者分別扣除背底和計(jì)數(shù)器死時(shí)間對(duì)所測(cè)值的影響,得到相應(yīng)的強(qiáng)度值IY和IO,兩者相除得到X射線強(qiáng)度之比KY= IY / IO。 直接將測(cè)得的強(qiáng)度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進(jìn)行三種效應(yīng)的修正。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,熒光效應(yīng)修正。經(jīng)過(guò)修正,誤差可控制在±2%以內(nèi)。普陀區(qū)優(yōu)勢(shì)探針推薦貨源
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