體外培養(yǎng)環(huán)境中,細胞自身沒有抗污染的能力,即使培養(yǎng)基會添加抗 生素,抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細菌、真 菌、支原體和病毒等,其中又以支原體污染蕞為普遍棘手。一旦污染了支原體的細胞將無法正常形成單克隆,而且細胞轉(zhuǎn)染過程容易死亡,細胞實驗效率極低。為了維持實驗的穩(wěn)定,必須對所有的實驗使用到的細胞進行支原體檢測。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒,利用qPCR的原理進行支原體檢測,試劑盒具備操作簡便、檢測快速、靈敏度高等優(yōu)點,是支原體檢測的優(yōu) 選方法。qPCR法支原體檢測方法有哪些。深圳PCR法支原體檢測產(chǎn)品
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機環(huán)節(jié)有哪些注意事項?①避免在不必要的情況下凍融試劑盒中的試劑,檢測試劑盒需避光儲存于-18℃以下;②本試劑盒所用的試劑不能隨意替換,以免影響檢測效果。不同批號的試劑盒各成分也不可相互混用;③嚴格區(qū)分質(zhì)控品和反應(yīng)試劑的使用,防止試劑的污染,導致假陽性;④完成實驗后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺與移液器。PCR相關(guān)實驗中污染問題時常發(fā)生,常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染、天然基因組DNA污染、試劑的污染以及標本間的污染。擴增產(chǎn)物污染是蕞嚴重、蕞難以處理的的污染類型,由于一旦發(fā)生PCR產(chǎn)物污染,實驗室必須停止實驗,直至污染被完全清 除為止,PCR產(chǎn)物污染短時間內(nèi)很難消除,一般需要2-4周才能消除,而且實驗相關(guān)的試劑、耗材有很大可能會被污染,需全部更換。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒,試劑盒經(jīng)過精心開發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測反應(yīng)中產(chǎn)生擴增,由此避免污染物帶來的檢測誤差,減少實驗室污染造成檢測結(jié)果不準確的可能性??谇恢гw檢測品牌南京正揚的支原體檢測試劑盒的操作流程。
常用的支原體檢測方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。指示細胞培養(yǎng)法(DNA染色法)則靈敏度比較低,因背景熒光的存在,細胞輕度支原體污染不易檢出;細胞裂解死亡產(chǎn)生碎片也會被熒光染料染色被誤認為是支原體染色所致造成假陽性;另外,熒光染色法一般要求培養(yǎng)無污染的指示細胞作為對照,增加了檢測的工作量。目前,PCR法為主流的支原體檢測手段,PCR法比傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法檢測時間大縮短,且靈敏度高。
南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理,定性檢測樣品中是否有支原體污染。本試劑盒涵蓋100多種支原體DNA序列,檢測快速,專一性強,靈敏度高,性能可靠,且能提供國際第三方檢測機構(gòu)出具的性能驗證報告,符合中、日、美國家的藥典要求。本公司還提供多樣化提取試劑盒,支持手工、自動化提取,自動化提取試劑盒又包括預(yù)分裝和非預(yù)分裝規(guī)格,客戶可根據(jù)實際情況進行訂購。qPCR法支原體檢測程序中,陰性對照(NCS)和空白對照(BLK)的區(qū)別:陰性對照(NCS):為樣品稀釋液經(jīng)核酸提取純化后所得,在提取純化前同待測樣品一樣需加入IC,NCS用于監(jiān)測提取環(huán)節(jié)是否存在紕漏,比如:操作問題、試劑性能異常、提取環(huán)節(jié)出現(xiàn)污染等情況;空白對照(BLK):在PCR檢測環(huán)節(jié)加入的對照品,BLK為純水,不含IC/支原體核酸;BLK用于監(jiān)測檢測環(huán)節(jié)是否出現(xiàn)污染,如:檢測試劑盒污染、試劑配制間的環(huán)境污染等;南京正揚的支原體檢測試劑盒能檢測哪些支原體型別?
用qPCR法進行支原體檢測時,出現(xiàn)擴增曲線末尾起跳的原因可能是什么?①陰性質(zhì)控或無模板對照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,考慮環(huán)境存在污染所致,建議對實驗環(huán)境做好控制,如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管,保證實驗分區(qū)(樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、PCR擴增區(qū))、用DNA清除劑處理環(huán)境等。②待測樣品曲線末尾出現(xiàn)起跳情況,在確保陰性質(zhì)控或無模板對結(jié)果正常的情況下,可以進行復測,復測結(jié)果一致,則考慮是樣品中待測物濃度較低所致。支原體檢測有幾種方法?蘇州肺炎支原體檢測品牌
支原體檢測的好處有哪些?深圳PCR法支原體檢測產(chǎn)品
支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物,據(jù)統(tǒng)計約有15%-35%的細胞被支原體污染。支原體會改變宿主細胞的結(jié)構(gòu)和功能等一系列特征,造成實驗結(jié)果不正確;干擾細胞代謝和生長,改變核酸合成,影響細胞抗原性,導致染色體改變,干擾病毒復制以及模仿病毒的作用。因此,每一株外來細胞在進入實驗室之前,都應(yīng)進行支原體檢測,并且應(yīng)對培養(yǎng)中的細胞定期(如每2-3個月)進行支原體檢測。建立定期的監(jiān)控方案,有助于提高科研效率,在污染發(fā)生在早期時及時處理??杀苊庵гw污染造成更大的損失!深圳PCR法支原體檢測產(chǎn)品