外泌體膜染料：PKH67、PKH26

組成：方法一：外泌體直接染色1.適量（10ug，BCA法測量）外泌體溶于500ulDiluentC中（可以用DPBS代替）；2.適量的PKH26（10ug外泌體推薦用量不超過1ul）染料溶于等體積的DiluentC中（可以用DPBS代替），溫和吹打混勻；3.將步驟2中的溶液加入1中并迅速吹打混勻。4.避光，室溫靜置孵育5-10min；5.加入等體積（2ml）的血清（exosomefree），或者1%BSA終止染色反應；6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。方法二：通過細胞染色間接對外泌體染色1.2×107細胞500g，5min離心，盡量棄去上清。2.加入1mlDiluentC，溫和吹打混勻。3.將4ulPKH26儲存液加入1mlDiluentC中（可以用DPBS代替），溫和吹打混勻；4.將步驟2中制備的細胞懸液加入步驟3中的制備的PKH26工作液，快速吹打混勻后室溫靜置孵育5min；5.加入等體積（2ml）的血清（exosomefree），或者1%BSA終止染色反應；6.使用超濾/超離方式洗凈未與外泌體結(jié)合的PKH26染料。注意：染色后的外泌體請立即使用或儲存于-80℃ 南京翌科生物做哪些外泌體實驗？北京做外泌體分析系統(tǒng)

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外泌體的產(chǎn)生過程為：細胞膜內(nèi)陷，形成內(nèi)體（endosome），再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB），比較后分泌到胞外成為外泌體。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息。外泌體比較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡，并命名為exosome。對于外泌體的作用，當時推測為細胞排泄廢物的一種方式。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗**反應。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關外泌體研究越來越多，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應答、抗原呈遞、細胞分化、**生長于侵襲等各種生物過程中。

外泌體的臨床應用：1.在疾病診斷中的應用潛能：外泌體存在于所有的生物體液中，并由所有細胞分泌，這使得外泌體在液體活檢中具有吸引力，可用于縱向取樣跟蹤疾病進展。外泌體的生物發(fā)生可以捕獲復雜的細胞外和細胞內(nèi)分子，可用于***的、多參數(shù)的診斷檢測。外泌體的表面蛋白也有助于其免疫捕獲和富集。外泌體診斷應用的重點疾病包括心血管病、影響***系統(tǒng)的疾病和**。這項努力正在迅速擴展到肝臟、腎臟和肺部的其他疾病。2.在疾病***中的應用潛能：外泌體向病變細胞運送功能物質(zhì)的特性有利于它們作為***載體。與脂質(zhì)體相比，外泌體的免疫***率低。此外外泌體已被證實且具有良好的耐受性，無明顯副作用翌科生物的外泌體提取做的好不好？

外泌體中包含mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等多種RNA分子，不同類型細胞所分泌的外泌體包含的RNA分子不同，這些RNA分子以外泌體為載體進入靶細胞后，會通過不同的機制對靶細胞產(chǎn)生影響。通過高通量測序技術(shù)分析外泌體RNA分子差異，是對外泌體RNA功能研究的有效手段。英瀚斯生物在提取高純度外泌體總RNA分子基礎上，為外泌體研究提供專業(yè)高通量測序服務，采用全新文庫構(gòu)建技術(shù)，可獲得mRNA、lncRNA、circRNA及miRNA等豐富信息，***提升外泌體研究深度及廣度趕緊告訴你如何選擇一家好的做外泌體的公司 ！上海專業(yè)做外泌體鑒定

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外泌體的分離對于理解它們的作用機制和它們在生物醫(yī)學科學中的應用是至關重要的。一些實驗室已經(jīng)成功地利用諸如超離心法、超濾法、層析法、基于聚合物的沉淀法和抗體偶聯(lián)磁珠的親和捕獲等技術(shù)分離外泌體。已有研究表明，密度梯度離心法可以分離出比較純凈的外泌體。1983年外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而比較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。比較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用。北京做外泌體分析系統(tǒng)

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