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鎮(zhèn)江螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑

來源: 發(fā)布時間:2022-10-30

    請穿實驗服并戴一次性手套操作。8)本產(chǎn)品只作科研用途!D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下,D-熒光素鉀被氧化,產(chǎn)生藍綠色的光(560nm),當?shù)孜镞^量時,產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、哺乳動物細胞的常用報告基因。由于沒有背景干擾,因此可以很容易地檢測出低至。用途D-熒光素鉀鹽是一類在生物體中發(fā)現(xiàn)的能引起生物發(fā)光的雜環(huán)化合物,如螢火蟲。在ATP存在下,螢光素酶將其氧化脫羧后會發(fā)光?;瘜W研究中可用于熒光素酶的基板。生物活性D-Luciferin是螢火蟲熒光素酶的底物。體外研究D-luciferinisthenaturalsubstrateoftheenzymeluciferase(Luc),μM.體內(nèi)研究Bioluminescenceimaging(BLI)usingthefireflyluciferase(Fluc)(5,10,15,and20min)μLofD-luciferin(intraperitoneallyorintravenously)stocksolutionpergramofbodyweight:normally~200μLfora20gmouseforastandard150mg/(eitherPotassiumorSodiumSalt)atroomtemperatureanddissolveindPBS。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。鎮(zhèn)江螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑

    螢光素酶(英文名稱:Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物熒光的酶的統(tǒng)稱,其中**有代表性的是一種學名為Photinuspyrali'的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶,螢火蟲發(fā)光的腹部或海洋的藍色發(fā)光波浪將大自然中生物發(fā)光奇跡呈現(xiàn)于世。在生物化學和分子生物學的早期,這一現(xiàn)象被認為是發(fā)展生物分析的有力平臺。1991年,Promega發(fā)布了***代螢光素酶分析產(chǎn)品,并啟動了基于螢光素酶的進一步創(chuàng)新計劃,通過持續(xù)致力于研究和創(chuàng)新生物發(fā)光系統(tǒng)建立了各種不同的分析技術(shù)。Promega螢光素酶技術(shù)發(fā)光史里程碑AGlo-ingHistoryofInnovationandDiscovery1990年12月,Promega***提出螢火蟲螢光素酶(Luc)作為一種新興報告基因技術(shù)的應用可能性。當時的人們認為,螢火蟲螢光素酶具備的生物發(fā)光特性、極高的靈敏度和快速簡單的檢測流程等特點,可能會對分子生物學家的研究產(chǎn)生重要的影響。幾個月后,***代螢火蟲螢光素酶報告基因載體和檢測試劑在Promega誕生,使這項新技術(shù)正式并更***地為全球研究人員服務(wù)。隨后30年里,Promega不斷在螢光素酶實驗工具領(lǐng)域推陳出新,保持技術(shù)***的地位。這里提到的螢光素酶即熒光素酶。[1]1991螢光素酶檢測系統(tǒng)。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期D-熒光素鹽也算是鈉鹽和鉀鹽。

    每孔加入100μl養(yǎng)24h后,Luciferin使其終濃度為150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活題成像系統(tǒng)檢測,分析發(fā)光強度與細胞數(shù)之間的相關(guān)性。4)細胞生長曲線繪制MCF7-luc細胞和作為對照取表達熒光素酶的MCF-7細胞,接種于24孔板,接種密度為2×104/孔。細胞接種后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔細胞,用細胞計數(shù)儀測定細胞數(shù)。以細胞生長天數(shù)為橫坐標,細胞數(shù)目為縱坐標,分別繪制兩種細胞生長曲線。二.動物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周齡,體重(15±2)g,雌雄各3只。取對數(shù)生長期的MCF-7用PBS重懸為2.5×10/ml懸液,每只裸鼠左右背側(cè)近腋部皮下接種100μl,共接種6只。接種后第5d采用德國BERTHOLD公司的活題成像系統(tǒng)檢測信號強度。以后每5d觀測一連續(xù)觀測30d。觀測前每只裸鼠戊巴比妥鈉麻醉(計量為:35mg/kg體重),按150mg/kg體重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,進行活題成像觀察皮下腫大的瘤的生長情況,定量分析各時間點的熒光值。繪制腫大的瘤皮下生長曲線.MCF-7-luc細胞裸鼠皮下移植瘤的病理形態(tài)學觀察MCF-7-luc細胞裸鼠皮下接種后25d,脫頸處死小鼠,取腫大的瘤組織,制成石蠟切片,切片厚度為3μm。

    可用熒光素酶檢測系統(tǒng)靈敏方便地測定熒光素酶基因的表達。熒光素酶報告基因有許多優(yōu)點:①非放射性;②比CAT及其他報告基因速度快;③比CAT靈敏100倍;④熒光素酶在哺乳細胞中的半衰期為3小時,在植物中的半衰期為3.5小時。由于半衰期短,故啟動子的改變會即時導致熒光素酶活性的改變,而熒光素酶不會積累。相反,CAT在哺乳細胞中的半衰期為50小時。熒光素酶濃度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范圍內(nèi),熒光信號強度與酶濃度成正比。在理想條件下,可檢測到l0-20mol/L的熒光素酶。檢測步驟:1.用生物信息學方法分析并預測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。2.設(shè)計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段,將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒(pGL3-basic)中。3.篩選陽性克隆,測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。4.擴增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,提純備用。同時準備相應的空載質(zhì)粒對照,提純備用。5.培養(yǎng)293(或其它目的細胞),并接種于24孔板中,生長10-24小時(80%匯合度)。6.將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細胞。7.提取蛋白并用于熒光素酶檢測。8.加入底物,測定熒光素酶的活性。9.計算相對熒光強度,并與空載對照比較。D-熒光素鉀鹽檢測是個人合作嗎?

    或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。2)用預熱好的組織培養(yǎng)基將儲存液稀釋至mg/mL的工作液濃度。3)去除細胞培養(yǎng)基。4)待圖像分析前,向細胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育5-10min,然后進行圖像分析。2.***成像分析1)用無菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲存液,混勻。2)用μm濾膜過濾除菌。立即使用,或分裝于-20℃避光保存,避免反復凍融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射。4)注射入體內(nèi)10-15min(待光信號達到更強穩(wěn)定平臺期)后進行成像分析。注:建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線,從而確定更高信號檢測時間和信號平臺期。注意事項1)本品(fireflyluciferin)和甲蟲熒光素(beetleluciferin)只只是不同公司在命名上的差異,都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2-thiazoline-4-carboxylicacid。2)注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射,因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線,確定更佳信號平臺期和更佳的檢測時間。3)如果要進行ATP的檢測,盡量避免外源ATP的污染,如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材,在進行熒光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。做D-熒光素鉀鹽測試真的靠譜嗎?徐州游離酸D-熒光素鉀鹽保質(zhì)期

D-熒光素鉀鹽測試怎么樣?鎮(zhèn)江螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽試劑

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