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本實驗技術(shù)要點: **細胞比較好經(jīng)過饑餓處理,并且小室上下培養(yǎng)基的FBS有濃度差,以保證細胞可以穿透基質(zhì)膠。鋪細胞要均勻,濾膜底部不能產(chǎn)生氣泡,否則會導(dǎo)致細胞染色不均勻,或者局部細胞無法穿透。根據(jù)細胞類型選擇合適的膜孔徑和膜類型。PET膜兼容***,適合絕大多數(shù)種類的細胞。侵襲實驗的細胞密度比較大,一般在1 0 6cells/cm2左右,不同**細胞的接種密度、培養(yǎng)時間不同,需要參考文獻和實驗摸索。細胞太少,遷移不過去;細胞太多,可能導(dǎo)致正常組和實驗組無差異。
c ) 用無血清的冷培養(yǎng)基稀釋ECM 膠至2 0 μ g/mL ,以5-10μg/cm2的密度加入到細胞小室的上層(按照ECM產(chǎn)品說明書的推薦比例和體積),輕輕搖晃使膠均勻鋪在膜上。以上操 作在冰上進行。 d)立即將鋪好ECM膠的細胞小室置于培養(yǎng)板中,于37°C孵育1小時,ECM膠可由液體凝成固體,吸走多余的或者未凝的膠。細胞用PBS清洗一次,EDTA或者0.05%胰酶消化,然后用包含5%BSA的無血清培養(yǎng)基中和,1500rpm離心5-10min。用無血清培養(yǎng)基重懸細胞,調(diào)整細胞密度至0.5-2.0x106cell/ml。上海益啟生物酶訂購方便。
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