動物實驗樣品如何保存?寄送要注意什么?
許多小伙伴對于實驗動物樣品保存、寄送方法都不太了解。今tian小編就集中地為大家講解實驗動物樣品如何科學有效的保存和寄送。
動物組織樣本如何保存?
為了防止組織樣本因離體時間太久細胞發(fā)生變化,樣本離體后比較好在20min以內(nèi)固定,以方便后續(xù)檢測。注意送檢的樣本必須是固定好、且固定時間超過2天。
不同的組織樣本、不同的檢測目的,其固定方法也不相同。
病理檢測樣本
1、組織樣本
a、組織離體清洗后應(yīng)立即固定,固定液一般10%中性福爾馬林或4%多聚甲醛(盡量不要用酒精固定),室溫保存。
b、固定用的器皿必須根據(jù)樣本體積而定,組織固定液的體積應(yīng)是樣本體積的10-15倍 ,且不宜用V型底,細長或小管固定。大組織標本應(yīng)切開固定,以免中間部分自容腐bai,如有特殊要求,請自行根據(jù)實驗要求選擇其他處理方式。
c、如果是冰凍切片標本,必須新鮮(處理步驟:組織離體后用OCT包埋,-80℃保存。送檢過程中必須有足夠多干冰或冰袋)。
d、特殊的組織需要用特定的固定液,避免樣本發(fā)生變化,影響后續(xù)檢測,具體要求參見表格1.
表格1
e、胃、腸道的內(nèi)容物處理需特別注意:切忌不能用擠的方式 ,會破壞黏膜 ,可以用針打10%中性福爾馬林或者4%多聚甲醛到胃和盲腸 里面去固定一會,半個小時切開用10%氯化鈉溶液清洗 ,然后再固定。
f、對于皮膚、肺等比較輕,容易漂浮在固定液上面的組織:可以選擇在固定液上面放沾濕的棉花團壓住 ,避免組織漂浮在固定液上導(dǎo)致固定不充分。
或者再完整的肺組織離體后,往主支氣管中灌固定液沖洗整個肺部,并使肺部充盈 ,然后把充盈后的整肺放入固定液中送檢。
2、細胞樣本
a、貼壁細胞:細胞消化后,離心,倒掉培養(yǎng)液保留細胞沉淀,用PBS洗一遍,離心倒掉液體保留細胞沉淀后 ,加固定液(10%中性福爾馬林或4%多聚甲醛)重懸,常溫送檢。
b、懸浮細胞:離心,倒掉培養(yǎng)液保留細胞沉淀,用PBS洗一遍,離心倒掉液體保留細胞沉淀后 ,加固定液 (10%中性福爾馬 林或4%多聚甲醛)重懸,常溫送檢。
3、電鏡樣本
取樣組織2mmX2mm大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定,后續(xù)實驗無法完成,務(wù)必請重視此過程。
取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。
織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4℃保存,4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4℃時樣本可保存1個月左右。
生化檢測樣本
1、血液樣本
根據(jù)不同的檢測指標,選擇不同的血液抗凝劑。-80℃保存。
生化:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素抗凝血漿;
ELISA:建議優(yōu)先選擇血清,其次選擇肝素或EDTA抗凝血漿;
凝血實驗:只能選擇枸櫞酸鈉抗凝血漿;
血常規(guī):只能選擇EDTA抗凝全血;
2、組織、細胞樣本
組織樣本離體清洗后液氮速凍5min,-80℃保存。
細胞沉淀后-80℃保存。
動物組織樣本如何寄送?
首先注意寄送過來的樣本為固定好、且按照樣本保存要求執(zhí)行的。
選用固定液固定的組織樣本、組織蠟塊、白片及其他非熒光染色玻片為常溫寄送。
4℃保存的樣本在寄送時選擇4℃冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。
熒光染色玻片在送檢:置于載玻片盒中低溫避光送檢,可在里面放入紙巾或氣泡膜防震 ,外面包一層錫紙避光,放足夠冰塊或干冰低溫送檢。
冰凍切片樣本送檢過程中必須有足夠多干冰。
送檢的標本應(yīng)具有物種、標本類型、標本離體時間、固定時間、固定類型、組織部位等信息,信息必須與送檢紙質(zhì)信息一致并清晰,并確定組織是否固定完全,如果難以判斷,請與病理實驗室工作人員聯(lián)系咨詢。
體積過小過薄的組織樣本易丟失,不建議送檢 (如厚度<1mm的樣本)。
樣本寄送量是多少?
如需要做組學相關(guān)檢測,則需要注意樣品的處理與送樣量,這里小編整理成了表格方便大家記錄。